細(xì)胞培養(yǎng)物污染往往是細(xì)胞培養(yǎng)實驗室最常遇到的問題,有時會帶來十分嚴(yán)重的后果。細(xì)胞培養(yǎng)污染物可分為兩大類:化學(xué)污染物,如培養(yǎng)基、血清和水中的雜質(zhì)、內(nèi)毒素、增塑劑和洗滌劑;生物污染物,如細(xì)菌、霉菌、酵母、病毒、支原體,以及其他細(xì)胞系的交叉污染。雖然不可能消除污染,但通過了解污染源并遵循良好的無菌消毒技術(shù),可以降低污染的頻率和嚴(yán)重性。
細(xì)胞培養(yǎng)箱是一種常用的實驗設(shè)備,在使用過程中是以一個細(xì)胞經(jīng)過大量培養(yǎng)成為簡單的細(xì)胞或極少分化的多細(xì)胞的一個過程,整個過程對培養(yǎng)環(huán)境的要求極其嚴(yán)苛,為避免被微生物污染,細(xì)胞培養(yǎng)箱的清潔與消毒是不可少的。然而,針對培養(yǎng)過程中面臨的各種污染源,各細(xì)胞培養(yǎng)箱微生物的控制方式和效果不盡相同,對于細(xì)胞來說,非常理想的培養(yǎng)環(huán)境同樣也適合這些污染物的生存,培養(yǎng)箱本身是不會辨別的,而細(xì)胞培養(yǎng)中大部分時間里細(xì)胞都是位于培養(yǎng)箱內(nèi),因為箱體內(nèi)能否抑菌或滅菌非常關(guān)鍵!
01
細(xì)胞培養(yǎng)微生物污染的原因:
1,取放細(xì)胞時引起的污染
細(xì)胞培養(yǎng)過程中,取放細(xì)胞是最基本的操作,培養(yǎng)房開關(guān)門的瞬間,環(huán)境中的微生物或多或少會進(jìn)入培養(yǎng)箱中,而且內(nèi)外溫差導(dǎo)致內(nèi)門冷凝水的產(chǎn)生,極易吸附微生物,都是造成培養(yǎng)箱污染的風(fēng)險因素。
2,滅菌不好造成的二次污染
細(xì)胞培養(yǎng)過程中,因其它操作問題(如培養(yǎng)基潑灑,水盤污染等),造成培養(yǎng)房的大規(guī)模污染也時常會發(fā)生,此時就需要對培養(yǎng)箱進(jìn)行滅菌消毒,常規(guī)的消毒(如紫外照射)只能達(dá)到表面消毒的效果,特別是對真菌等頑固性污染,無法進(jìn)行滅菌,導(dǎo)致后續(xù)培養(yǎng)過程中細(xì)胞污染頻發(fā)。
02
解決霉菌目前常用的消毒產(chǎn)品類型:
培養(yǎng)箱是可以對細(xì)菌、霉菌、微生物的培養(yǎng)、保存、植物栽培、育種實驗的專用恒溫設(shè)備。那么當(dāng)培養(yǎng)箱出現(xiàn)霉菌污染我們應(yīng)該怎樣進(jìn)行處理呢?首先我們可以看看培養(yǎng)箱自身帶不帶有滅菌功能,如果沒有我們可以先用純水擦洗,再用奧克泰士殺孢子劑擦拭,晾干即可完成殺菌作用。奧克泰士殺菌消毒劑可解決細(xì)胞培養(yǎng)箱微生物的污染問題。
一、常用消毒產(chǎn)品類型
常見成分:醇類、醛類、季銨鹽化合物、戊二醛、胍類、過氧化氫、過氧乙酸以及新型過氧化氫銀離子(德國Oxytech)等。市場上的消毒產(chǎn)品種類很多,每種消毒產(chǎn)品也各有自己的優(yōu)勢和不足,在這種情況下了解消毒產(chǎn)品特性,根據(jù)自身的消毒要求選擇適合的產(chǎn)品十分重要。
殺菌劑是解決霉菌的有效的方式。然而,在選擇殺菌劑時需要特別小心,因為許多殺菌劑含有害物質(zhì)(如汞、砷、醛類等),這些物質(zhì)在室內(nèi)長期應(yīng)用會對健康產(chǎn)生不良影響。表面活性劑/季銨鹽化合物的作用有局限性,只能有選擇性的殺滅部分霉菌,不能消除所有類型的霉菌。含氯的殺菌劑產(chǎn)品會釋放刺激性氣味,在與酸接觸時會產(chǎn)生劇毒的氯氣。
二、清除霉菌:國際上通用慣例選用
由于霉菌具有很強(qiáng)的抗性,目前專業(yè)領(lǐng)域內(nèi)殺霉菌,國際上通用慣例選用:
1) 復(fù)合型過氧化氫(過氧化氫+銀離子);
2) 復(fù)合型過氧乙酸(過氧乙酸+過氧化氫);
兩者都對霉菌和霉菌孢子有極為理想的殺滅效果,兩者的區(qū)別是主要是過氧化氫銀離子是無色無味無毒的,基本無腐蝕,但價格成本高一些;復(fù)合過氧乙酸的成本稍低一些,但過氧乙酸本身具有較大的毒性和刺激性,對金屬等材料的腐蝕性很大。
關(guān)于奧克泰士應(yīng)用
奧克泰士,復(fù)合型過氧化氫消毒劑,主要成分過氧化氫 銀離子,無色無味無毒,無殘留性,基本無腐蝕,不產(chǎn)生微生物耐藥性,不造成重復(fù)污染等特點,由于其作用原理,能夠殺滅包括細(xì)菌芽孢、真菌孢子、酵母菌、霉菌、病毒等各種類型的微生物。經(jīng)過IFS國際食品標(biāo)準(zhǔn)認(rèn)證,歐盟EMAS檢測認(rèn)證,ISO9001、ISO14001環(huán)境管理體系認(rèn)證等。針對實驗室的藥品、容器、培養(yǎng)基、無菌衣、膠塞等具有廣泛的材料適應(yīng)性,可以作為固定的實驗儀器設(shè)備等消毒滅菌產(chǎn)品。可以用噴灑、擦拭和浸泡的方式進(jìn)行消毒滅菌!
注意事項
使用前后,應(yīng)對工作臺面進(jìn)行消毒,并定期清潔周圍區(qū)域和設(shè)備。
日常清潔時,在工作前和工作期間,特別是在發(fā)生任何潑濺后,應(yīng)使用70%乙醇擦拭工作臺面。(因為70%-75%乙醇優(yōu)勢是對細(xì)菌具有較好的殺滅作用,但對真菌的效力有限,可以使用奧克泰士來解決乙醇無法較好解決的酵母、霉菌、芽孢的污染問題)。