在實驗室培養(yǎng)細胞的過程中,容易受到多種因素的影響造成污染,細胞污染不能被消除,但可以采取各種措施進行預(yù)防和處理。細菌污染便是實驗室細胞污染的常見現(xiàn)象之一。
一、細菌污染原因分析
細胞的細菌污染主要有以下幾種:
1. 革蘭氏陽性菌:大腸桿菌、枯草桿菌、假單胞菌等;
2. 革蘭氏陰性菌:白色葡萄球菌等。
細菌污染細胞后,會導(dǎo)致細胞的培養(yǎng)液變渾濁、ph發(fā)生改變、有刺鼻氣味等,嚴(yán)重時還會導(dǎo)致細胞死亡,影響正常實驗進程。因此在發(fā)生細菌污染后,應(yīng)第一時間調(diào)查原因,及時解決問題,避免污染進一步擴大。
細胞發(fā)生細菌污染的常見原因有:
1. 人員:人員在操作規(guī)程中沒有按規(guī)定穿戴好無菌服和手套、口罩、頭套等防護用品;
2. 儀器:培養(yǎng)皿、吸管、細胞培養(yǎng)箱等設(shè)備儀器在使用前沒有進行滅菌或滅菌過程中存在死角;
3. 培養(yǎng)基:在培養(yǎng)基的配制過程中人員裸手接觸培養(yǎng)基;培養(yǎng)基的高溫滅菌過程中溫度和壓力沒有達到滅菌要求;培養(yǎng)過程中培養(yǎng)瓶密閉不嚴(yán);
4. 規(guī)章制度:規(guī)章制度的制定過程中有漏洞,忽視了某些操作環(huán)節(jié)的滅菌重要性;
5. 環(huán)境:環(huán)境的日常滅菌頻次低、滅菌不充分、沒有選擇合適的滅菌方法等。
二、實驗室應(yīng)從哪些方面入手做好細菌防控
在日常的實驗中需對操作人員多加監(jiān)督檢查,確保穿戴符合規(guī)范,并完善相應(yīng)的規(guī)章制度,便于日常指導(dǎo)人員操作。培養(yǎng)基在高溫滅菌過程中溫度和壓力應(yīng)達到規(guī)定要求;在進行培養(yǎng)前仔細檢查培養(yǎng)瓶是否按要求進行包扎;定期檢查滅菌設(shè)備,確保設(shè)備管道沒有泄漏,設(shè)備處于正常使用期限內(nèi)。
針對儀器和環(huán)境主要有以下幾種滅菌方法:
1. 物理滅菌:主要指紫外線滅菌,通過紫外線作用于細菌的DNA,干擾細菌DNA的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄從而殺死細菌。紫外線滅菌具有高效、廣譜的優(yōu)點,但容易在滅菌過程中留有死角,并且隨著使用時間的增長紫外線的穿透力會逐漸減弱,且會對人體健康造成一定的危害。
2. 化學(xué)滅菌:包括臭氧滅菌、消毒劑滅菌等。
①臭氧滅菌:臭氧滅菌可殺滅細菌、病毒、孢子等微生物,且作用迅速、不容易產(chǎn)生二次污染、經(jīng)濟性價比高,但需注意臭氧的使用需在一定的濃度范圍內(nèi),否則也會危害人體健康,對人體的呼吸道和消化道有一定的刺激作用;
②消毒劑滅菌:常用的消毒劑主要有75%乙醇、過氧化氫、新潔爾滅、殺孢子劑等。消毒劑可大規(guī)模噴灑擦拭,不留死角。值得注意的是75%乙醇、過氧化氫和新潔爾滅無法殺滅孢子等耐受力強的微生物,殺孢子劑可以殺滅孢子等耐受力強的微生物,但需按照對應(yīng)的比例使用才能達到更好的消毒效果。
三、消毒劑該如何選擇
中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T27405-2008《實驗室質(zhì)量控制規(guī)范 食品微生物檢測》中對消毒劑有如下規(guī)定:
針對實驗室選擇消毒劑時,需同時具備紫外線和臭氧滅菌高效、廣譜的優(yōu)點,還應(yīng)盡可能地?zé)o污染,對儀器設(shè)備等基本無腐蝕性,同時不危害人體健康,便于人員操作。奧克泰士幫您解決細菌、孢子污染實驗室細胞的問題。
奧克泰士消毒劑主要的活性物質(zhì)是過氧化氫和微量的銀離子,經(jīng)奧克泰士處理后的物體表面中銀離子的含量極其微量不可見且無毒,不會對環(huán)境產(chǎn)生二次污染。由過氧化氫分離的元素氧可直接攻擊微生物的細胞壁,破壞細胞壁使銀離子與微生物的酶結(jié)合,從而使微生物失去活性,殺菌率可達99.999%。奧克泰士可有效殺滅大腸桿菌、葡萄球菌、孢子、真菌等實驗室常見污染源,為實驗室細胞培養(yǎng)提供安全保障。
四、日常防控措施
實驗室發(fā)生細菌污染時,不僅會影響細胞的正常生長,嚴(yán)重時還會污染環(huán)境,危害人體健康,因此選擇合適的消毒方法定期對實驗室開展消毒滅菌工作至關(guān)重要。同時應(yīng)制定并執(zhí)行實驗室衛(wèi)生管理制度,確保實驗室內(nèi)的清潔和衛(wèi)生;定期對實驗室進行清潔和消毒處理,包括桌面、地面、設(shè)備等;加強對實驗人員的衛(wèi)生教育和監(jiān)督管理,從日常入手做好細菌防控。